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羊駝納米抗體開發 羊駝納米抗體開發
抗體發現

羊駝納米抗體開發

  • 自建羊駝基地
  • 每年100+的項目交付經驗
  • 高豐度

服務介紹

VHH抗體，也稱為單域抗體，是一種有前景的新一代治療性抗體技術，適用于癌癥免疫療法和各種其他應用。結構具有獨特性，使其與傳統抗體區分開來，例如它們的尺寸、溶解度、內在穩定性，以及容易定制成多功能結構的能力。它們可以識別不常見或隱蔽的表位，并有效地結合酶目標的腔室或活性位點。此外，VHH抗體在藥物發現方面具有不可替代的優勢，因為它們的開發和制造過程既簡單又快速。

VHH是最小的抗原結合片段，來源于駱駝科動物（如羊駝、美洲駝和駱駝）的重鏈抗體。它們的小尺寸和結構允許它們穿透組織并到達傳統抗體可能難以到達的目標，此外它們的穩定性和與特定目標的高親和力結合能力使得他們在治療、診斷和研究工具方面特別受歡迎。1

我們的抗體發現服務還包括:

羊駝納米抗體開發介紹

百英生物擁有VHH抗體發現和生產的專業科學家團隊，結合公司自有的噬菌體展示技術，已經在VHH抗體發現領域具備了一定的行業競爭力。

羊駝納米抗體開發

服務亮點

自建羊駝基地

  • 300+羊駝可用
  • 每個項目配有專屬羊駝

每年100+項目交付經驗及案例

  • 多種免疫/淘選/篩選方法
  • 多種驗證檢測(ELISA、SPR、FACS、內化、ADCC 等)

高豐度

  • 通過高多樣性和大容量實現成功最大化
  • 庫大小在108 - 109
立即咨詢

百英生物已開發的VHH親和力分布情況

  • 0%AF-5
  • 4%AF-6
  • 16%AF-7
  • 33%AF-8
  • 32%AF-9
  • 13%AF-10
  • 2%AF-11
  • 0%AF-12
  • 0%AF-13

數據源：615個VHH抗體（部分VHH）

Calculation example:

Total number of VHH of affinity 10-9 M from different target
/
Total number of VHH of from different target (615 unique sequence)
=
32%

該平臺開發的VHH抗體親和力范圍從10-8到10-11M，大部分落在10-8和10-9M之間。以上數據圖表僅來源于客戶的部分項目數據，可能存在抽樣偏差。不同的親和力分布可能無法反映不同目標之間的差異。（數據來源SPR親和力檢測結果）

服務流程

抗原表達或由客戶提供
動物免疫
PBMC分離
mRNA提取和逆轉錄
噬菌體文庫構建
庫的淘選和篩選

（固相淘選、液相淘選和細胞淘選）

VHH表達陽性克隆測序
和序列分析
VHH表達
VHH 驗證

應用

VHH由于其體積小等特性以及接受基因工程的能力，已被廣泛應用于各種領域，如臨床治療和免疫診斷以及環境監測。2

在抗腫瘤治療中，Caplacizumab是一種治療血栓性血小板減少性紫癜和血栓的雙價VHH抗體。3

嵌合抗原受體(CAR)T療法：在CAR構建體中，通常使用VHH抗體作為CAR-T的抗原結合域，因為它們具有獨特的特性和制造可行性。4

羊駝納米抗體開發服務詳情

服務步驟 服務詳情 時間線 交付物
階段Ⅰ：抗原制備/抗原驗證
  • 抗原可由百英生物制備或由客戶提供
 3-4周/2-3天驗證
  • SDS-PAGE>85%，內毒素<100EU/mg，抗原的Binding結合檢測數據
階段Ⅱ：羊駝免疫和PBMC分離/保存
  • 可以根據效價決定取對應的PBMC建庫
  • 第2、3和4次免疫后的ELISA滴度將被監測并將報告發送給客戶
  • 第2、3和4次免疫后的PBMC將被提取并儲存在Trizol中
 8-10周
  • 基于第2、3和4次免疫的ELISA滴度。
階段Ⅲ：VHH噬菌體庫生成
  • RNA提取和cDNA制備
  • VHH擴增
  • 電擊感受態大腸桿菌庫
  • 多樣性和容量測量
  • 克隆計數和測序以測量庫的容量
 3-4周
  • VHH容量達到108 - 109
階段Ⅳ：庫生物淘選和篩選
  • 至少3輪淘選（液相、固相淘選和細胞淘選）
  • ELISA驗證，鑒定和評估陽性克隆篩選
  • 陽性克隆測序和測序結果分析
 3-4周
  • 保證至少提供20個獨特序列
VHH-Fc抗體生產（可選）
  • 基因合成，亞克隆，質粒制備
  • 瞬時表達和純化
  • QC分析
 2周
  • 純化抗體（SDS-PAGE>95%，內毒素水平<1EU/mg）
親和力排名（可選） 通過Biacore 8K測定親和力 0.5周

案例分享

案例1: 抗X抗原

經過淘選和篩選后，獲得了53個獨特的序列并在HTP CHO表達系統中表達。

通過ELISA針對抗原X驗證

vhh-case1-1
vhh-case1-2
vhh-case1-3
vhh-case1-4

53個VHH抗體中有49個與X結合

通過SPR針對抗原X驗證

vhh-case1-5
  • 5No Binding
  • 9E-7
  • 21E-8
  • 16E-9
  • 2E-10
親和力范圍為5.36x10-7M至7.66x10-10M。

53個VHH抗體中有48個與X結合

通過流式細胞術針對CHO-K1/X過度表達細胞驗證

vhh-case1-6
vhh-case1-7
vhh-case1-8
vhh-case1-9

53個VHH抗體中有43個與CHO-K1/X細胞結合

通過激動劑活性測定驗證

vhh-case1-10

331個抗體顯示出顯著的激動劑活性（高于1.5倍同型值）

通過阻斷試驗驗證

vhh-case1-11
vhh-case1-12
vhh-case1-13
vhh-case1-14

18個抗體顯示出顯著的阻斷活性。

案例2: VHH抗體發現多跨膜靶標A

首先，我們用編碼靶點A的DNA免疫羊駝，然后通過靶點A過表達細胞系增強其免疫反應。羊駝血清可以特異性地結合到靶點A過表達細胞，且不與空白細胞非特異性結合。

vhh-case2-1
vhh-case2-2
vhh-case2-3

噬菌體庫構建從PBMC、庫大小約為1.1x1E10、插入率>95%

Antigen Immunization
DNA encoding Target A 1&2
CHO-K1-Target A 3, 4, 5
Cell panning Input (CFU/ml) Output Output/Input
1 2.00E+12 9.00E+07 4.50E-05
2 1.33E+12 2.10E+08 2.10E+08
3 2.10E+08 2.10E+08 2.10E+08
Total clone OD450
(293T-Target A) >0.5		 OD450
(293T-blank) >0.1		 Combined with Target A
clone number		 Targeted
Clone %		 Unique
0635-Human Target A 88 2 0 2 2.27% 1
0635-Human Target A 88 18 12 6 6.82% 2
0635-Human Target A 88 55 41 14 15.91% 10
vhh-case2-4
vhh-case2-5
vhh-case2-6
“作為VHH抗體發現的一名研究人員，愿與百英生物一起為推動生物醫藥發展做出貢獻，保證交付高質量、高活性的VHH抗體。”
Yang Xiang
向 陽
抗體發現團隊

FAQs

  • 什么是VHH抗體？

    VHH抗體是僅含重鏈抗體的抗原結合片段。它們源自于駱駝科動物如羊駝的免疫系統。由于它們高度穩定并且比傳統抗體小得多，VHH抗體非常適合于包括診斷測試、治療方法和研究工具在內的廣泛應用。

  • 什么是重組抗體？

    重組抗體是通過合成基因和抗體片段在體外產生的單克隆抗體，而不是使用雜交瘤。它們可以采用幾種不同的形式，如全長免疫球蛋白(Ig)，單價抗體片段，如單鏈可變片段(scFv)和抗原結合片段(Fab)，以及多聚體(二聚體scFvs)或三聚體(三聚體scFvs)。5

  • 如何從駱駝科動物中分離出VHHs？

    • 1、免疫文庫的構建

      首先，通過讓駱駝對特定抗原產生免疫反應，從其B細胞中提取抗體基因，然后將其插入表達載體中。這一步驟可以通過以下方法實現： 自然免疫文庫：通過讓駱駝對特定抗原免疫，從血液中提取淋巴細胞，純化B細胞，再轉化和擴增其mRNA，構建免疫文庫。 人工合成文庫：基于納米抗體骨架序列，通過設計變體引入特定的氨基酸殘基，構建合成文庫。

    • 2、利用噬菌體展示技術篩選VHHs

      通過將抗體序列與噬菌體載體融合，使外源蛋白能夠展示在噬菌體表面。利用抗原-抗體相互作用，篩選出特異性的VHHS。具體步驟如下: 將VHH克隆到載體上，轉化到大腸桿菌中，構建含有VHH的文庫。 利用噬菌體展示技術，將抗原與文庫進行孵育，通過固相淘選、液相淘選等方法淘選篩選出與抗原特異性結合的VHHS。

    • 3、通過酵母雙雜篩選進一步驗證

      利用酵母系統進行VHHs的篩選和驗證。具體步驟如下： 將抗原基因與gal4 DNA結合域融合，構建誘餌基因。 將VHH克隆到DNA-AD獵物質粒中，轉化到酵母細胞中。 通過Y2H篩選，篩選出與抗原結合的VHHs。

    • 4、后續純化和驗證

      篩選出的VHHs可以通過親和層析、酶切等方法進行純化，并通過質譜、光譜等技術進行驗證。6

參考文獻

  • Atarhouch, T., Muyldermans, S., Robinson, G., Hammers, C., Songa, E. B., Bendahman, N., & Hammers, R. (1993). Naturally occurring antibodies devoid of light chains. Nature, 363(6428), 446-448. https://doi.org/10.1038/363446a0
  • Bever, C. S., Dong, X., Vasylieva, N., Barnych, B., Cui, Y., Xu, L., Hammock, B. D., & Gee, S. J. (2016). VHH antibodies: Emerging reagents for the analysis of environmental chemicals. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408(22), 5985. https://doi.org/10.1007/s00216-016-9585-x
  • Bannas, P., & Hambach, J. (2017). Nanobodies and Nanobody-Based Human Heavy Chain Antibodies As Antitumor Therapeutics. Frontiers in Immunology, 8, 309808. https://doi.org/10.3389/fimmu.2017.01603
  • Bao, C., Gao, Q., Li, L., Han, L., Zhang, B., Ding, Y., Song, Z., Zhang, R., Zhang, J., & Wu, X. (2021). The Application of Nanobody in CAR-T Therapy. Biomolecules, 11(2), 238. https://doi.org/10.3390/biom11020238
  • Muyldermans, S. (2021). A guide to: Generation and design of nanobodies. The Febs Journal, 288(7), 2084-2102. https://doi.org/10.1111/febs.15515
  • Arbabi-Ghahroudi, M. (2022). Camelid Single-Domain Antibodies: Promises and Challenges as Lifesaving Treatments. International Journal of Molecular Sciences, 23(9). https://doi.org/10.3390/ijms23095009

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